கோடை அறிவியல் வழிகாட்டி: 40°C வெப்ப அலை மூலக்கூறு பரிசோதனைகளைச் சந்திக்கும் போது

சீனாவின் பெரும்பகுதியில் சமீப காலமாக அதிக வெப்பநிலை நீடிக்கிறது. ஜூலை 24 ஆம் தேதி, ஷான்டாங் மாகாண வானிலை ஆய்வு மையம் மஞ்சள் நிற உயர் வெப்பநிலை எச்சரிக்கையை வெளியிட்டது, உள்நாட்டுப் பகுதிகளில் அடுத்த நான்கு நாட்களுக்கு "சவுனா போன்ற" வெப்பநிலை 35-37°C (111-133°F) மற்றும் 80% ஈரப்பதம் இருக்கும் என்று கணித்துள்ளது. டர்பன், ஜின்ஜியாங் போன்ற இடங்களில் வெப்பநிலை 48°C (111-133°F) ஐ நெருங்குகிறது. வுஹான் மற்றும் சியாவோகன், ஹூபே ஆகியவை ஆரஞ்சு நிற எச்சரிக்கையின் கீழ் உள்ளன, சில பகுதிகளில் வெப்பநிலை 37°C ஐ விட அதிகமாக உள்ளது. இந்த கடுமையான வெப்பத்தில், பைப்பெட்டுகளின் மேற்பரப்பிற்கு அடியில் உள்ள நுண்ணிய உலகம் அசாதாரண இடையூறுகளை சந்தித்து வருகிறது - நியூக்ளிக் அமிலங்களின் நிலைத்தன்மை, நொதிகளின் செயல்பாடு மற்றும் வினைப்பொருட்களின் இயற்பியல் நிலை அனைத்தும் வெப்ப அலையால் அமைதியாக சிதைக்கப்படுகின்றன.

நியூக்ளிக் அமிலம் பிரித்தெடுப்பது காலத்திற்கு எதிரான ஒரு போட்டியாக மாறிவிட்டது. வெளிப்புற வெப்பநிலை 40°C ஐ விட அதிகமாக இருக்கும்போது, ​​ஏர் கண்டிஷனர் இயக்கப்பட்டிருந்தாலும் கூட, இயக்க மேசையின் வெப்பநிலை பெரும்பாலும் 28°C க்கு மேல் இருக்கும். இந்த நேரத்தில், திறந்தவெளியில் விடப்படும் RNA மாதிரிகள் வசந்த காலம் மற்றும் இலையுதிர் காலங்களை விட இரண்டு மடங்கு வேகமாக சிதைவடைகின்றன. காந்த மணி பிரித்தெடுப்பில், கரைப்பானின் துரிதப்படுத்தப்பட்ட ஆவியாதல் காரணமாக இடையக கரைசல் உள்ளூரில் நிறைவுற்றது, மேலும் படிகங்கள் எளிதில் வீழ்படிவாக்கப்படுகின்றன. இந்த படிகங்கள் நியூக்ளிக் அமில பிடிப்பின் செயல்திறனில் பெரிய ஏற்ற இறக்கங்களை ஏற்படுத்தும். கரிம கரைப்பான்களின் நிலையற்ற தன்மை ஒரே நேரத்தில் அதிகரிக்கிறது. 30°C இல், குளோரோஃபார்ம் ஆவியாதலின் அளவு 25°C உடன் ஒப்பிடும்போது 40% அதிகரிக்கிறது. செயல்பாட்டின் போது, ​​புகை மூடியில் காற்றின் வேகம் 0.5மீ/வி என்பதை உறுதி செய்வது அவசியம், மேலும் பாதுகாப்பு செயல்திறனைப் பராமரிக்க நைட்ரைல் கையுறைகளைப் பயன்படுத்துவது அவசியம்.

PCR பரிசோதனைகள் இன்னும் சிக்கலான வெப்பநிலை இடையூறுகளை எதிர்கொள்கின்றன. Taq என்சைம் மற்றும் தலைகீழ் டிரான்ஸ்கிரிப்டேஸ் போன்ற வினைப்பொருட்கள் திடீர் வெப்பநிலை ஏற்ற இறக்கங்களுக்கு மிகவும் உணர்திறன் கொண்டவை. -20°C உறைவிப்பான் அகற்றப்பட்ட பிறகு குழாய் சுவர்களில் ஒடுக்கம் வினை அமைப்பிற்குள் நுழைந்தால் 15% க்கும் அதிகமான நொதி செயல்பாட்டு இழப்பை ஏற்படுத்தும். அறை வெப்பநிலையில் (>30°C) 5 நிமிடங்கள் வெளிப்பட்ட பிறகு dNTP தீர்வுகள் கண்டறியக்கூடிய சிதைவைக் காட்டலாம். அதிக வெப்பநிலையால் கருவியின் செயல்பாடும் தடைபடுகிறது. ஆய்வக சுற்றுப்புற வெப்பநிலை >35°C ஆகவும், PCR கருவியின் வெப்பச் சிதறல் அனுமதி போதுமானதாக இல்லாதபோது (சுவரில் இருந்து <50 செ.மீ.), உள் வெப்பநிலை வேறுபாடு 0.8°C வரை அடையலாம். இந்த விலகல் 96-கிணறு தகட்டின் விளிம்பில் பெருக்க செயல்திறனை 40% க்கும் அதிகமாகக் குறைக்கலாம். தூசி வடிகட்டிகளை தவறாமல் சுத்தம் செய்ய வேண்டும் (தூசி குவிப்பு வெப்பச் சிதறல் செயல்திறனை 50% குறைக்கிறது), மேலும் நேரடி ஏர் கண்டிஷனிங் தவிர்க்கப்பட வேண்டும். மேலும், ஒரே இரவில் PCR பரிசோதனைகளைச் செய்யும்போது, ​​மாதிரிகளைச் சேமிக்க PCR கருவியை "தற்காலிக குளிர்சாதன பெட்டியாக" பயன்படுத்துவதைத் தவிர்க்கவும். 4°C வெப்பநிலையில் 2 மணி நேரத்திற்கும் மேலாக சேமித்து வைப்பது, சூடான மூடியை மூடிய பிறகு ஒடுக்கம் உருவாக வழிவகுக்கும், இதனால் எதிர்வினை அமைப்பு நீர்த்துப்போகும் மற்றும் கருவியின் உலோக தொகுதிகள் அரிக்கப்படும்.

தொடர்ச்சியான உயர் வெப்பநிலை எச்சரிக்கைகளை எதிர்கொள்ளும் போது, ​​மூலக்கூறு ஆய்வகங்களும் எச்சரிக்கை ஒலிக்க வேண்டும். விலைமதிப்பற்ற RNA மாதிரிகள் -80°C உறைவிப்பான் பின்புறத்தில் சேமிக்கப்பட வேண்டும், அதிக வெப்பநிலை காலங்களுக்கு மட்டுமே அணுகல் இருக்க வேண்டும். -20°C உறைவிப்பான் கதவை ஒரு நாளைக்கு ஐந்து முறைக்கு மேல் திறப்பது வெப்பநிலை ஏற்ற இறக்கங்களை அதிகரிக்கும். அதிக வெப்பத்தை உருவாக்கும் உபகரணங்களுக்கு இருபுறமும் பின்புறமும் குறைந்தது 50 செ.மீ வெப்பச் சிதறல் இடம் தேவைப்படுகிறது. மேலும், சோதனை நேரத்தை மறுசீரமைக்க பரிந்துரைக்கப்படுகிறது: RNA பிரித்தெடுத்தல் மற்றும் qPCR ஏற்றுதல் போன்ற வெப்பநிலை உணர்திறன் செயல்பாடுகளுக்கு காலை 7:00-10:00; தரவு பகுப்பாய்வு போன்ற சோதனை அல்லாத பணிகளுக்கு பிற்பகல் 1:00-4:00. இந்த உத்தி முக்கியமான படிகளில் அதிக வெப்பநிலை உச்சங்கள் குறுக்கிடுவதை திறம்பட தடுக்க முடியும்.

வெப்ப அலையின் போது மூலக்கூறு பரிசோதனைகள் நுட்பம் மற்றும் பொறுமை இரண்டிற்கும் ஒரு சோதனையாகும். இடைவிடாத கோடை வெயிலில், உங்கள் பைப்பெட்டை கீழே வைத்து, உங்கள் மாதிரிகளில் கூடுதல் பனிப் பெட்டியைச் சேர்க்க வேண்டிய நேரம் இதுவாக இருக்கலாம், இதனால் கருவி அதிக வெப்பத்தை சிதறடிக்கும். வெப்பநிலை ஏற்ற இறக்கங்களுக்கான இந்த மரியாதை, கோடை மாதங்களில் மிகவும் விலைமதிப்பற்ற ஆய்வகத் தரமாகும் - எல்லாவற்றிற்கும் மேலாக, கோடையின் 40°C வெப்பத்தில், மூலக்கூறுகளுக்கு கூட கவனமாகப் பாதுகாக்கப்பட்ட "செயற்கை துருவப் பகுதி" தேவைப்படுகிறது.